如何進行藥物的含量測定方法與驗證？

藥物的含量:指藥物中所含主成分的量，是評價藥物質量的重要標準。

可供藥物含量測定的分析方法:

(1)容量分析法

①優點:操作簡便，結果準確，方法耐用性高。

②缺點:方法缺乏專屬性。

③適用:適用于對結果準確度與精密度要求較高的樣品的測定。

(2)光譜分析法

①優點:簡便，快速，靈敏度高，并具有-一定的準確度。②缺點:方法專屬性稍差。

③適用:適用于對靈敏度要求較高、樣本量較大的分析項目。

(3)色譜分析法

①優點:高靈敏度與高專屬性，并具有一定的準確度。

②缺點:結果計算需要對照品。

③適用:適用于對方法的專屬性與靈敏度要求較高的復雜樣品的含量測定。3、為確保分析結果的可靠性，要求分析方法應準確、穩定、耐用。

•方法選擇中的供試品因素

-化學原料藥的含量測定首選容量分析法

-藥物制劑的含量測定首選色譜分析法

-藥物制劑的定量檢查首選光譜分析法

•含量測定方法須準確、穩定、耐用

第一節 定量分析方法的分類與特點

一  容量分析法:

•基本術語

-滴定：將滴定劑通過滴管滴入待測溶液中的過程

-滴定劑：濃度準確已知的試樣溶液

-指示劑：滴定分析中能發生顏色改變而指示終點的試 劑

-滴定終點：滴定分析中指示劑發生顏色改變的那一點 （實際）

-化學計量點：滴定劑與待測溶液按化學計量關系反應 完全的那一點（理論）

-滴定誤差：滴定終點與化學計量點不一致產生的誤差

•特點

-方法簡便易行

-方法耐用性高

-測定結果準確

-方法專屬性差

•適用范圍：較多用于化學原料藥物的含量 測定

•有關計算:

-滴定度：

每1 ml某摩爾濃度的滴定液所相當的 被測藥物的重量。中國藥典用mg表示

-滴定度的計算

-含量的計算

/直接滴定法:

/所配制滴定液濃度與規定濃度不一致時：

/間接滴定法：生成物滴定法

/簡接滴定法：剩余量滴定法

二、光譜分析法：

•紫外-可見分光光度法(200?400?760nm)

-朗伯-比耳定律

-E：單位液層厚度時的吸收度。有兩種表示法：

/摩爾吸收系數：在一定波長下，溶液濃度為1mol/L, 厚度為1cm時的吸收度。用e表示。

/百分吸收系數：在一定波長下，溶液濃度為1%

(W/V),厚度為1cm時的吸收度。用E比表示。

-特點與適用范圍

/簡便易行

/靈敏度高，可達10-4g/ml?10-7g/ml。

/準確度較高，相對誤差為2%?5%。

/專屬性較差

/較少應用于原料藥含量測定，多用于制劑的定量檢 查。

-儀器校正與檢定

/波長：常用儀器中制:丁的486.02nm與656.10nm譜 線校正，或用欽玻璃的尖銳吸收峰。

/吸光度的準確度：與規定的吸收系數比較。

/雜散光的檢查

/對溶劑的要求：截止波長

/測定法：波長掃描與吸光度讀數

-含量測定方法

/對照品比較法

/吸收系數法

/計算分光光度法

/比色法

•熒光分析法

-特點與適用范圍

/靈敏度高,可達 1010g/mH1012g/ml.

/濃度太大會有“自熄滅”作用，故適用于低濃度的 溶液。

/干擾因素多，須做空白試驗。

/取樣少，方法快速。衍生化試劑提高了適用范圍

-干擾的排除

/溶劑：進一步純化溶劑，空白試驗

/溶液：適當的濃度，減少雜質，降低溶氧，調節pH

/玻璃量器：高潔凈度

/溫度：穩定的溫度

-含量測定

/相對定量方法測定

/線性范圍較窄

式中：Ci為供試品溶液的濃度，Cr為對照品溶液的濃度，Ri為供試品溶液 的讀數，Rib為供試品溶液試劑空白的讀數，Rr為對照品溶液的讀數，Rrb 為對照品溶液試劑空白的讀數。

三、色譜分析法：

?特點與適用范圍

-高靈敏度

-高專屬性

-高效能與超音速度

-適用于藥物制劑，尤其復方制劑的含量測定。

•分類

-依據分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、 分子排阻色潛等

-依據分離方式：紙色譜法，薄層色譜法，柱色譜法， 氣相色譜法，高效液相色譜法等

•高效液相色譜法

-藥品標準對HPLC方法改變的要求

-對儀器的一般要求：

-色譜柱：填料，孔徑與粒徑，柱直徑，溫度，pH等

-檢測器：通用型檢測器與選擇性檢測器，對流動相 的要親

-流動相：反相系統與正相系統

-系統適用性試驗

-色譜柱的理論塔板數

?色譜峰的分離度

?色譜系統的重復性:

?色譜峰的拖尾因子

d1為極大峰至峰前沿之間的距離。T應在0.95-1.05之間。

-測定法：

1、外標法：一點法；兩點法；工作曲線法

2、內標法

•氣相色譜法

-檢測器、固定液及特殊指定的色譜柱材料不能更換

-對儀器的一般要求

-載氣

-色譜柱填料，柱管材質，固定液

-檢測器種類，使用溫度

-進樣方式

-系統適用性試驗

-測定法：多釆用內標法

第二節 樣品分析的前處理方法

樣品分析的前處理方法

•在分析含金屬或鹵素、氮、硫、磷等元素 的有機藥物前，需進行適當的藥品前處理。

•分類

-不經有機破壞的前處理方法

-經有機破壞的前處理方法

樣品分析的前處理方法

•不經有機破壞的前處理方法

-直接測定法——含金屬或C-M不牢固的有機金屬藥物

•配位滴定法

•氧化還原滴定法

經水解后測定法一鹵素聯脂肪碳鏈（溶于適當溶劑再水解）

-堿水解后測定法

•酸水解后測定法

-經氧化還原后測定法——鹵素聯芳環牢固（一般用于測碘）

•經有機破壞的前處理方法

-濕法破壞

•硫酸-硫酸鹽法——凱氏定氮法

•硝酸-高氯酸法

•硝酸-硫酸法

•其它濕法

-干法破壞

•高溫熾灼法

•氧瓶燃燒分解后測定法

-硫酸-硫酸鹽法——凱氏定氮法

•將含氮藥物與硫酸在凱氏定氮燒瓶中共熱，藥物分子 中有機結構被氧化分解（亦稱“消解”或“消化”） 成二氧化碳和水，有機結合的氮則轉變為無機氮，并 寫過量的硫發結合另寵磋氫程及硫發鉉，經氫童化鈉 堿化后釋放出氮氣，并隨水蒸氣餡出，用祖酸渣液或 定墨的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定疲滴是。

-高溫熾灼法

-將含待測元素的有機藥物經高溫灼燒灰化，使有機結 構分解而待測元素轉化為無機元素或可溶性無機鹽， 以供分析。根據分析對象與目的不同，常加無水碳酸 鈣、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。

-氧瓶燃燒法

第三節藥品質量標準分析方法驗證

藥品質量標準分析方法驗證

•方法驗證的目的

•需驗證的分析項目：鑒別試驗；雜質定量 或限度檢查；含量測定等

•驗證內容：準確度；精密度；專屬性；檢 測限/定量限；線性及范圍；耐用性等

1、準確度

•含量測定方法的準確度

-原料藥的含量測定

-制劑的含量測定

•雜質定量測定方法的準確度

-使用雜質對照品

-缺少雜質對照品

•數據要求

2、精密度

•標準偏差（SD）與相對標準偏差（RSD）

•驗證內容:重復性/中間精密度/重現性

•數據要求

3、專屬性

•鑒別反應

•含量測定和雜質測定

-陰性對照

-陽性對照

-純度測試

4、檢測限/定量限

•檢測限常用方法

-目視法：非儀器法

-信噪比法：色譜法

-標準偏差法：光譜法

•定量限：信噪比要求不同

•數據要求

5、線性及范圍

•線性

-回歸方程

-相關系數

•范圍

-原料藥和制劑含量測定

-制劑含量均勻度檢查

-溶出度或釋放度中的溶出量測定

-特殊元素含量測定

-雜質測定

六、耐用性

•耐用性

•典型的變動因素

-被測溶液

-環境因素

-液相色譜法中典型因素

-氣相色譜法中典型因素

7、驗證內容的選擇

•非定量分析方法

•定量分析方法

•微量定量分析方法

①已有重現 性驗證， 不需驗證 卷間精密

②如一種方 法不夠專 屬，可用 其他分析 方法予以 補充

③視具體情 況予以驗證

8、藥品質量標準中分析方法驗證示例

•阿司匹林及其片劑的藥品質量標準

-鑒別:

•化學鑒別法

•紅外光譜法

-檢查

•溶液的澄清度

•游離水楊酸

•溶出度

-含量測定

•酸堿滴定法

•高效液相色譜法